親和色譜填料結(jié)構(gòu)

更新時(shí)間：2021-12-10 點(diǎn)擊次數(shù)：2583

親和層析是根據(jù)一種生物分子間的特異相互作用來分離物質(zhì)的層析方法，利用待分離物質(zhì)與配體間所具有的特異性親和力來達(dá)到分離目的的一類特殊層析技術(shù)。如抗原與抗體、DNA與RNA、酶與底物或抑制物等。

親和色譜填料由基體、配體和間隔臂三部分組成。

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基體

基體是有一定粒度、一定剛性、多孔的表面有大量可反應(yīng)基團(tuán)的固體物質(zhì)，用于支撐間隔臂和配體，在其表面通過反應(yīng)鍵合上間隔臂和配體后制得親和色譜填料?；w有兩類：一類是有機(jī)聚合物，如纖維素、交聯(lián)葡聚糖、交聯(lián)瓊脂糖等；第二類是多孔玻璃和硅膠。

基體應(yīng)具備的條件：

1.基體是不溶性支持物，具有三維的多孔網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，有足夠大的排阻極限，大分子能不受阻礙地進(jìn)出內(nèi)孔。

2.基體顆粒應(yīng)該是均勻的球形并具剛性，粒度均勻，孔徑分布范圍小，機(jī)械性能好。

3.基體必須是親水性及惰性的，其骨架與蛋白質(zhì)或其他重要生化物質(zhì)的作用必須極弱，以降低非特異性吸附。

4.基體理化性質(zhì)穩(wěn)定，不會(huì)被制備填料時(shí)的試劑和流動(dòng)相破壞。

5.基體必須具有大量表面活性基團(tuán)。

配體

配體是接到基體或間隔臂上與蛋白質(zhì)分子發(fā)生作用的部分，配體的選擇是親和色譜的關(guān)鍵。配體有兩類：一類叫特異性配體，只對(duì)一種蛋白質(zhì)具有結(jié)合能力；另一類叫組特異性配體，也叫通用性配體，對(duì)某一類蛋白質(zhì)具有結(jié)合能力。

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配體應(yīng)具備的條件：

	配體與待分離的生物分子有特異性結(jié)合。
	配體既要能有效地與生物分子結(jié)合，親和力相當(dāng)，又能有效地與所吸附的生物分子解離。
	配體既有能特異性地與待純化的蛋白質(zhì)分子相結(jié)合的活性點(diǎn)，又有與基體或間隔臂相偶聯(lián)的化學(xué)基團(tuán)。
	配體自身應(yīng)具有良好的穩(wěn)定性，能耐受偶聯(lián)以及洗脫時(shí)的溫度變化和化學(xué)環(huán)境，制得的填料可以多次重復(fù)使用。

盡可能選擇無離子基團(tuán)、疏水性小的的配體。

間隔臂

親和色譜分離對(duì)象是生物大分子，其體積大，并且只能以特定的部位與配基作用，通常因?yàn)榭臻g位阻效應(yīng)，使其作用位點(diǎn)不易接近配體。所以，一般在配體與基體之間接上一個(gè)有一定長(zhǎng)度的間隔臂，使配體伸離基體表面一定的距離，就可以克服這空間阻礙。

間隔臂的兩端都有能與其他基團(tuán)反應(yīng)的活性官能團(tuán)，活性官能團(tuán)如NH₂、OH、COOH等，它的一端先與基體反應(yīng)，形成帶間隔臂的基體，產(chǎn)物仍帶一個(gè)可反應(yīng)的端基，可以再與配體偶聯(lián)。

親水性的、無離子基團(tuán)的、沒有太多支鏈或大基團(tuán)的、適當(dāng)鏈長(zhǎng)的小分子適合作間隔臂。

月旭科技親和層析填料：

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1. Protein A Solid/Protein A 4FF/Protein G Tanrose 4FF 抗體親和介質(zhì)

2. Ni Tanrose 6FF（NTA/IDA）/Ni Tanrose 6HP（NTA）/Ni Tanrose 4FF （NTA/IDA）/Co Tanrose 6FF（NTA）金屬螯合親和介質(zhì)

3. IMAC Tanrose 6FF/Chelating Tanrose 6FF金屬螯合親和介質(zhì)

4. Benzamidine Tanrose 4FF苯甲脒親和介質(zhì)

5. GST Tanrose 4FF谷胱甘肽親和介質(zhì)

6. Heparin Tanrose 6FF/Heparin Tanrose 6HP肝素親和介質(zhì)

7. Endotoxin rem Tanrose 4FF內(nèi)毒素親和填料

8. NHS-activiated Tanrose 4FF/CNBr-activiated Tanrose 4FF預(yù)活化親和填料

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